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CHO-DHFR重组蛋白表达服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)拥有高素质的专家和十多年的上游生物制药开发经验,为您提供重组蛋白表达与抗体制备研究服务。卡梅德生物基于的CHO细胞,采用GS/DHFR表达系统。将进行瞬时转染评估以确保选择稳定的单克隆。我们的细胞系广泛用于基因功能研究、基因编辑、药物筛选和重组蛋白生产。

DHFR体系是目前被广泛使用的体系,并且也是在工业生产中常用的方法。但该体系的缺点也是很明显的,耗时耗力费时费力,并且获得高产克隆需要重复选择和克隆的循环。此外,通过Dhfr /Mtx 方法获得的高产克隆通常不稳定随着细胞培养时间的延长,蛋白质合成迅速减少。

 

DHFR系统工作原理:

 

1显示了 DHFR 酶如何催化叶酸转化为四氢叶酸。这种前体是细胞复制的,嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。

当 CHO 细胞中的蛋白质表达系统有 DHFR 缺失时,研究人员用重组 DNA转染CHO 细胞,该 DNA 由与 DHFR 基因紧密相连的目的基因组成。甲氨蝶呤 (MTX) 选择系统用于选择产生目标蛋白质的 CHO 细胞。MTX 是一种类似于叶酸的药物,它与 DHFR 结合,从而抑制四氢叶酸的产生,而四氢叶酸是嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。

在基因扩增过程中,CHO 细胞在越来越高水平的 MTX 中培养。将选择具有增加的 DHFR 基因拷贝并结合感兴趣的基因的 CHO 细胞。

DHFR 水平不足的 CHO 细胞被剥夺了核苷前体(次黄嘌呤和胸苷)并死亡。一旦被选中,来自 CHO DHFR 阴性宿主的转染细胞系不需要培养基中的 MTX。 

 

图1 DHFR 酶催化叶酸转化为四氢叶酸 

CHO-DHFR系统的表达载体

 

卡梅德生物的科学家设计了专用于CHO-DHFR系统的载体,即pKMD-CHO-DHFR载体。此外,卡梅德的科学家可根据客户的项目需求为您定制表达质粒,详情请与卡梅德生物的工作人员联系

 

服务内容

 

项目

客户提供

交付内容

CHO哺乳表达细胞系构建

目标序列

克隆表达载体

稳定表达的单克隆

成品蛋白(量可达7g/L

实验报告

 

请与卡梅德的技术专家联系,我们将对您提供的序列进行评估,以确保提升单克隆筛选的成功。

 

服务优势:

 

--我们的专家经验丰富,实验成功率高

--我们还为您的下一步实验提供优化的细胞培养和生产方案

--多重表达模式:稳定表达和瞬时表达

--多种融合标签载体和宿主,以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

 

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