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蛋白纯化服务

 

  

蛋白质的分离纯化是蛋白质组学研究的重要环节, 卡梅德生物科技(KMD BioscienceTM)多年来致力于蛋白表达与纯化的相关研究,拥有顶尖的蛋白纯化技术、多种纯化体系,能够提供多元化的蛋白纯化方案。仅GE纯化基质已有十多种,能同时大规模、扫描式的进行蛋白纯化和分离工作,节省宝贵的科研时间,以高质量满足客户需求。我们可为您提供定制的蛋白纯化服务包括,有/无标签重组蛋白,天然蛋白的纯化分离等。根据蛋白性质设计亲和纯化、离子交换、分子筛、疏水等多种蛋白纯化实验方案,获得的高纯度蛋白质,可根据客户需求一对一进行个性化方案定制,能够满足蛋白质折叠、重结晶等一系列精细实验要求。

 

蛋白纯化常用方法

常用分离纯化手段包括:膜分离技术、沉淀分离技术、电泳分离技术、层析分离技术。其中膜分离技术与沉淀分离技术属于蛋白粗提取,电泳分离技术主要应用于检测分析。蛋白纯化目前主要选择层析分离技术,通常分为以下几种方法:

 

纯化方法

原理

适用范围

凝胶过滤层析

根据分子间的大小或者形状差异进行分离

特别适用于分离相对分子质量大于2000的高分子化合物和相对分子质量差异大的混合物及低聚物。

离子交换层析

根据蛋白质分子表面静电荷的差异进行分离

阳离子交换主要是改变pH,主要应用于等电点大于5的蛋白质;阴离子交换主要是改变盐浓度,适用于大部分蛋白质,除杂能力较强,对热源质、核酸、外毒素及电荷性有差别的蛋白效果显著。

疏水层析

根据蛋白质与疏水吸附剂之间的疏水作用差异进行分离

适用范围广,原则上可用于所有蛋白质的纯化,适合于从大体积中提取低含量的目标蛋白,对DNA及小牛血清去除率较高。

亲和层析

根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的

适用于抗原抗体亲和纯化,以及一系列标签纯化。

 

亲和纯化常用标签

常用类型有:HIS标签(镍柱纯化)、GST标签(谷胱甘肽)、Flag标签、MBP标签、Strep tag标签

 

比较项目

大小

纯化原理

特点

HIS Tag

一般为6-8个组氨酸组合

组氨酸残基上的咪唑基团可与层析介质中的金属离子螯合,再通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱达到纯化效果

标签小,纯化简单;

能与其他标签形成双标签;

能纯化可溶性/包涵体蛋白

GST Tag

26KD

利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱原理来进行纯化

可溶性标签,提高蛋白表达的可溶性;

不能应用于包涵体等需变形处理的纯化

Flag Tag

8个氨基酸

DYKDDDDK

琼脂糖上偶联有flag抗体,可采用竞争性洗脱或酸性洗脱

在真核表达系统中表达效率更高;

可以纯化有活性的融合蛋白,

 

MBP Tag

42.5 KD

 

多糖树脂吸附

 

可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高表达产物的水溶性,但标签较大,

对蛋白的结构和功能会有一定影响。

适用于包涵体的纯化

Strep Tag

8个氨基酸

WSHPQFEK

 生物素biotin)和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)之间的结合反应。

纯化流程温和能保持目标蛋白活性;

能进行变性条件下的纯化;

价格相对HIS Tag而言较高

 

服务类型

我们可为您提供定制的蛋白纯化服务包括:有/无标签重组蛋白分离纯化,天然蛋白纯化分离详细见下方表格:

 天然蛋白纯化服务

项目名称

                                纯化方案                                

天然大分子蛋白分离纯化

选用适当孔径的分子筛分离纯化,配合使用阴、阳离子吸附柱以及HLPC,鉴定并收取相应洗脱峰。

天然小分子蛋白分离纯化

多层级分离过滤配合分子筛去除大分子杂质,结合使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子蛋白,经 HPLCMS鉴定纯化。

混合未知蛋白样品分离纯化

由卡梅德生物制定相应方案进行分离纯化,并经质谱鉴定、活性鉴定等多种方案确认分离产物。                       

  

重组蛋白纯化服务 

项目名称

纯化方案

重组蛋白脱标签及分离纯化

商品化亲和纯化树脂,如Ni柱,GST-Beads等分离纯化带有6xHisGSTSUMOMBP融合蛋白,获得纯度90%以上融合蛋白

不含标签的重组蛋白纯化

抗体亲和纯化;也可选择类似于天然蛋白纯化方式,依项目而定

包涵体变性与复性纯化

根据蛋白质不同的性质,可以选择尿素、盐酸胍、去垢剂、极端pH等,以保证最大程度获得单体状态的变性蛋白

卡梅德现推出可以高效纯化His标记的融合蛋白的PRO-HIS NI NTA PURE kit,如需购买请联系我们的销售代表或拨打热线电话:022-82164980。

 

项目流程

Step1蛋白检测前与预实验:SDS-PAGE检测蛋白情况;小体积纯化与检测

Step2蛋白纯化与检测:大量纯化;SDS-PAGEWB检测(视项目而定);浓度检测

交付材料:纯化报告,原始图片,蛋白产品。

 

服务优势

---设备一流,纯化方式多元化,适合不同来源的重组蛋白或天然蛋白;

---专业技术团队为您量身定制最佳纯化方案;

---提供全面的蛋白纯化分析报告;

 

如何订购?

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com