服务热线
022-82164980

周一至周六

8:00-18:00

在线客服
 

文档下载

联系我们

服务电话:022-82164980

地址:天津市武清区国际企业社区A5号楼四层,301700

邮箱:info@kmdbioscience.com

GST融合蛋白纯化服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年来致力于重组蛋白表达与制备研究。我们拥有经验丰富的技术团队,积累了充足的重组抗体和重组蛋白制备经验,同时具备多种纯化体系,为蛋白表达与纯化方面提供多种选择。我们的技术人员可以根据蛋白性质采用不同类型的蛋白纯化技术,设计多种蛋白纯化实验方案,能够为客户提供高品质的重组蛋白纯化服务。

GST融合蛋白是分子生物学领域的基本工具,其广泛用于蛋白质-DNA及蛋白-蛋白间的相互作用研究。卡梅德生物提供GST融合蛋白纯化服务,严格的控制体系保证交付蛋白的纯度和质量。我们拥有不同体积的发酵罐和多元化的重组蛋白纯化体系,可以满足高通量及大规模的重组蛋白表达需求。基于抗体平台、蛋白平台等完善的平台体系建设,我们涵盖了从基因合成、载体构建到蛋白表达及纯化等一站式服务。

 

GST融合蛋白纯化简介:

 

GST (Glutathione S-transferase),即谷胱甘肽巯基转移酶,全长211个氨基酸,分子量为26kDa,广泛应用于重组蛋白表达以及亲和纯化实验中。GST具有高度的亲水性,因此也常被用于改善目的蛋白的可溶性。例如某些蛋白进行6´His 融合表达的时候,如果产生的蛋白可溶性较差,可以采用更换质粒载体的方法进行GST融合表达以改进目的蛋白的可溶性。

GST纯化系统是利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过二硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。GST能够催化GSH形成GS-GST的复合物。根据这一特点,将GSH交联到琼脂糖凝胶颗粒(Beads)上后,利用GST的催化能力形成Bead-GS-GST-protein的复合物从而将目的蛋白从复杂的混合物中纯化出来。

 

服务内容:

  

步骤

服务内容

Step 1

LB平板上挑取单克隆接种到2ml LB液中(Amp+)220-250rpm, 37℃振荡培养至OD600值约为0.6

Step 2

将活化后菌体接种到TB培养基中,测定起始OD600值,37℃振荡培养,当OD600值增加0.6-1.0单位时,加入IPTG至终浓度10μM继续摇床培养3-4h

Step 3

4000rpm离心10min收集菌体

Step 4

5-10倍柱体积的lysis buffer重悬细菌,加入PMSF等蛋白酶抑制剂,超声400-600瓦破碎细胞

Step 5

4℃, 8000rpm, 离心20min取上清过谷胱甘肽琼脂糖柱

Step 6

过柱前后,均用5´柱体积的lysis buffer洗层析柱,收集流穿液

Step 7

Elution buffer洗脱,收集洗脱峰前,峰中间和峰后,SDS-PAGE鉴定纯度

Step 8

GST标签移除:凝血酶等酶切后,非变性胶分离纯化。

 

我们的服务优势:

 

--适用范围广,可在不同宿主中表达;

--特异性好,纯化方便且温和;

--丰富的经验积累,成熟的技术路线,保证获得的纯品蛋白可以满足后续精细实验要求;

--拥有多种重组蛋白表达系统和多种纯化体系;

--完整的上下游服务:提供从基因合成、载体构建到蛋白表达及纯化的一站式服务;

--服务可定制:根据客户需求制备,为客户提供包括信息咨询,详细实验方案的设计与实施等相关服务

 

实验案例:

 

 

(A) 重组GST-VER2纯化:Lane 1, 未诱导细胞裂解液; Lane 2, IPTG诱导,箭头所示为目的蛋白; Lane M, markers。

(B) 纯化VER2 蛋白: Lane 1, 纯化 GST-VER2重组蛋白; Lane 2, 凝血酶消化GST-VER2; Lane 3, 纯化 VER2;Lane M, markers。

 

关于更多GST融合蛋白纯化的技术问题,请查看我们的技术资料或者联系我们的技术支持人员获得进一步的帮助。

 

如何订购?

 

 如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com