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骆驼免疫VHH抗体文库构建服务

 

 

 

卡梅德生物科技(KMD BioscienceTM)能够为客户提供高质量的,基于M13噬菌体展示的驼源抗体筛选服务,包括双峰驼和单峰驼(羊驼)来源的纳米抗体噬菌体展示技术服务。我们的科学家拥有多年的重链抗体(Vhh抗体)文库展示构建,筛选经验,能够在较短的时间周期内获得高品质的纳米抗体。

 

驼源抗体文库制备-重链抗体背景

传统意义上血清抗体主要包括IgG1IgG2IgG3IgG4 四种亚型,而驼源主要血清抗体包括IgG1IgG2IgG3三种类型,其中IgG1与传统抗体结构相似,含有2条重链和2条轻链;IgG2IgG3缺少CH1和轻链结构域,因此也被称为重链抗体(heavy Chain Antibody, hcAb),如图1所示:

图1 经典抗体与重链抗体模式结构

(a) 传统抗体 及其Fab/scFv抗体形式 (b) 重链抗体及其VHH抗体形式

重链抗体在羊驼和骆驼血清中的分步是不均衡的,骆驼血清抗体中重链抗体占比约为60-75%,羊驼血清抗体中重链抗体占比约为40-50%。这这种显著的差异导致了构建的骆驼VHH抗体文库具有先天的优势,如表1所示。驼源抗体文库主要是指利用驼源重链抗体的可变区,即VHH区域序列构建的VHH抗体文库,又叫纳米抗体文库。VHH抗体的特点是只含有重链抗体的抗原结合区,如图2所示,氨基酸长度约为110AASDS-PAGE显示分子量约为15kDa(远小于传统抗体150kDa的分子量),具有优秀的稳定性,能够抵抗极端的pH环境。 同时在VHH人源化改造方面,也具有良好的适应性,容易满足Car-T等免疫细胞的改造和分选实验要求。

图2 羊驼重链抗体与VHH抗体模式

骆驼与羊驼VHH抗体文库对比

 

比较项目

骆驼VHH抗体文库

羊驼VHH抗体文库

抗原耐受量

高,多种抗原混合,高剂量免疫

较高,多种抗原混合中等免疫剂量

抗血清滴度

中和抗体效价

较高

抗体亲和力

更容易获得高亲和力抗体

能够获得高亲和力抗体

抗原需求量

4-6mg,纯度>85%

2-3mg,纯度>85%

采血量

一次可采血100ml

一次20ml血液

PBMC细胞量

一般

有效库容

高,免疫库108-109

高,免疫库107-108

免疫代价

较低

小分子抗原反应性

一般