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竞争ELISA检测亲和力服务

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)致力于抗体抗原方面的研究,为客户提供准确、快速的亲和力测定服务。抗体及其片段是广泛用于研究、诊断和治疗的工具。 在表征抗体分子的不同参数中,对抗原-抗体亲和力测定的数据尤为重要。有几种可用的方法来进行抗原抗体亲和力检测,但其中大多数要么依赖昂贵的设备(表面等离子体共振),要么不普遍适用(荧光修饰、透析)或需要修饰的抗原(放射性沉淀标记的抗原)。竞争ELISA法测定亲和力不是这种情况,它仅依赖于少量纯化抗原和抗体,即可进行抗原抗体亲和力检测

比如:在抗原抗体结合位点的筛选(抗体以及小分子多肽的筛选)实验中,竞争ELISA法测定亲和力可以快速、精确的进行抗原抗体、抗原与小分子多肽、蛋白质与抗体等亲和力测定以及高通量的亲和力数据排序,为客户节省了大量的实验成本,包括:人力、时间、费用等,并且为客户后续的实验项目提供了精确的数据支撑。

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)的科学家为客户提供高性价比的快速、精确的高通量亲和力测定以及亲和力排序服务。为客户提供1-2周的快速检测周期,同时卡梅德的技术专家能够为客户提供专业、有效的售前技术咨询,为客户的实验项目提供有力的保障。

 

竞争ELISA法

 

1.为了溶液中抗原抗体亲和力检测亲和常数的真实性,必须严格要求实验条件以避免亲和值偏差低估十倍。首先,最好使用单价抗体片段(Fab 或 scFv),可以调整二价片段的数学计算,但前提是抗原每个分子包含单个结合位点。然而,随着抗体工程的出现,现在很容易在大肠杆菌中产生这样的片段。其次为了准确测量游离抗体浓度,ELISA不应显改变液相平衡。这需要进行初步实验以确定正确的实验条件。最后,建议使用曲线拟合程序来避免方程线性化引入的偏差,例如Scatchard 变换。

2.当抗体片段 (A) 与溶液中的抗原混合时,我们可以写成

[A]=[A]f+[A]b

[B]=[B]f+[B]b

3.这里A、[A]f、[A]b分别是总的、游离的和结合的A浓度,[B]f和[B]b分别是游离和结合的“结合位点” 浓度。如果抗原是单体,[B] 等于抗原浓度。但如果抗原是多聚体,

[B]=n[Ag]=nx

4.其中 n 是每个抗原的位点数(例如,同源二聚体为2),x 是抗原浓度。由于每个结合位点绑定一个(A)

Bb=Ab

5.因此质量定律为

Kd=[A]f*[B]f/[B]b

 

图1 竞争ELISA原理示意图

 

图2 竞争ELISA法快速测定配体受体

 

实验条件:

 

1) PBS10X:称取: 6.1 g Na2HPO4 (43 mM)2 g KH2PO4 (15 mM)NaCl 80 g (1.37 M)2 g KCl (27 mM),溶解到1L的蒸馏水中。

2) PBST: 0.1% (v/v) Tween-20溶解到PBS中。

3)PBSM: 3% (w/v) 脱脂奶粉溶解到PBS中。

4)碳酸盐缓冲液(如果需要):称取50 mM Na2CO3pH9.6混合 16 ml 0.2 M Na2CO334 ml 0.2 M 碳酸氢钠和150 ml H2O

5)PNPP1 mg/ml 对硝基苯基磷酸二钠盐溶解 100 mM Tris100 mM NaCl5 mM MgCl2 pH9.5中。

 

详细实验步骤请点击链接:竞争ELISA检测亲和力服务实验方案

 

样品要求

   

客户提供

要求

客户可提供抗体,蛋白,多肽,等样品

1 缓冲液:PBS, HEPPS不含有机试剂,不含Tris

2 抗原:蛋白(多肽)>2mg,浓度>0.5mg/ml

3 蛋白样品(含抗体)>200ug,浓度>0.5mg/ml

4 多肽样品:>200ug,浓度>1mg/ml

 

注意事项

 

抗体浓度较低的情况下,我们建议使用竞争ELISA法来进行亲和力测定。同时一般使用HRP偶联抗体不能很好的检测出信号,因此我们建议使用AP偶联的鼠单克隆抗体。卡梅德生物一直致力于亲和力的研究,我们提供的亲和力测定服务可以准确地测定抗体间的亲和力。

 

服务流程:

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com