卡梅德生物（KMD Bioscience）致力于抗体抗原方面的研究，为客户提供准确、快速的亲和力测定服务。抗体及其片段是广泛用于研究、诊断和治疗的工具。 在表征抗体分子的不同参数中，对抗原-抗体的亲和力测定的数据尤为重要。有几种可用的方法来进行抗原抗体亲和力检测，但其中大多数要么依赖昂贵的设备（表面等离子体共振），要么不普遍适用（荧光修饰、透析）或需要修饰的抗原（放射性沉淀标记的抗原）。而竞争ELISA法测定亲和力不是这种情况，它仅依赖于少量纯化抗原和抗体，即可进行抗原抗体亲和力检测。

比如：在抗原抗体结合位点的筛选（抗体以及小分子多肽的筛选）实验中，竞争ELISA法测定亲和力可以快速、准确的进行抗原抗体、抗原与小分子多肽、蛋白质与抗体等亲和力测定以及高通量的亲和力数据排序，为客户节省了大量的实验成本，包括：人力、时间、费用等，并且为客户后续的实验项目提供了准确的数据支撑。

卡梅德生物（KMD Bioscience）的科学家为客户提供高性价比的快速、准确的，高通量的亲和力测定以及亲和力排序服务。为客户提供1-2周的快速检测周期，同时卡梅德的技术专家能够为客户提供专业、有效的售前技术咨询，为客户的实验项目提供有力的保障。

竞争ELISA法：

1．为了溶液中抗原抗体亲和力检测的亲和常数的真实性，必须严格要求实验条件以避免亲和值偏差低估十倍。首先，使用单价抗体片段（Fab 或 scFv），可以调整二价片段的数学计算，但前提是抗原每个分子包含单个结合位点。然而，随着抗体工程的出现，现在很容易在大肠杆菌中产生这样的片段。其次，为了准确测量游离抗体浓度，ELISA不应显著改变液相平衡。这需要进行初步实验以确定正确的实验条件。最后，建议使用曲线拟合程序来避免方程线性化引入的偏差，例如Scatchard 变换。

2．当抗体片段 (A) 与溶液中的抗原混合时，我们可以写成

[A]=[A]_f+[A]_b

[B]=[B]_f+[B]_b

3．这里A、[A]_f、[A]_b分别是总的、游离的和结合的A浓度，[B]f和[B]b分别是游离和结合的“结合位点” 浓度。如果抗原是单体，[B] 等于抗原浓度。但如果抗原是多聚体，

[B]=n[Ag]=nx

4．其中 n 是每个抗原的位点数（例如，同源二聚体为2），x 是抗原浓度。由于每个结合位点绑定一个(A)，

B_b=A_b

5．因此质量定律为

K_d=[A]_f*[B]_f/[B]_b

图1 竞争ELISA原理示意图

图2 竞争ELISA法快速测定配体受体

实验条件：

--PBS10X：称取：6.1 g Na2HPO4 (43 mM)，2 g KH2PO4 (15 mM)，NaCl 80 g (1.37 M)，2 g KCl (27 mM)，溶解到1L的蒸馏水中

--PBST：0.1% (v/v) Tween-20溶解到PBS中

--PBSM：3% (w/v) 脱脂奶粉溶解到PBS中

--碳酸盐缓冲液（如果需要）：称取50 mM Na₂CO₃，pH9.6，混合 16 ml 0.2 M Na₂CO₃、34 ml 0.2 M 碳酸氢钠和150 ml H2O

--PNPP：1 mg/ml 对硝基苯基磷酸二钠盐溶解在 100 mM Tris、100 mM NaCl、5 mM MgCl2 pH9.5中

样品要求：

注意事项：

在抗体浓度较低的情况下，我们建议使用竞争ELISA法来进行亲和力测定。同时一般使用HRP偶联抗体不能很好的检测出信号，因此我们建议使用AP偶联的鼠单克隆抗体。卡梅德生物一直致力于亲和力的研究，我们提供的亲和力测定服务可以准确地测定抗体间的亲和力。

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