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双荧光素酶标记检测服务

卡梅德实验建立的完善的细胞培养平台能够提供给客户多种细胞学基础实验,包括免疫荧光双荧光素酶标记检测细胞凋亡检测细胞增殖/毒性检测荧光原位杂交检测服务细胞划痕实验细胞流式检测等服务。

 

免疫检测服务 — 双荧光素酶标记基因检测

卡梅德生物提供的双萤光素酶标记基因检测系统是一种基于萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶体内表达和催化的基因报告技术。将目的基因的转录调控元件(即5’启动子区)克隆进带有荧光素酶基因质粒的上游,或将目的基因的3’-UTR区克隆进带有荧光素酶基因质粒的下游,构建成报告基因(reporter gene)质粒。通过转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾荧光素酶用来做转染的内参,以校正不同样品之间转染的转染效率。

图1 构建载体与转染细胞:分别构建含有萤火虫(firefly)和海肾(renilla)荧光素酶基因载体,共转染细胞。收集细胞裂解液,加入两种酶相应的底物,根据荧光比例进行启动子表达水平定量分析。

主要实验流程:

双荧光素酶标记基因检测应用:

*启动子与转录因子相互作用检测

*潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测

*潜在启动子/启动子核心区域检测

*启动子区可能的转录因子结合位点检测

*病毒/细胞相互作用

*药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)

*射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)

*miRNA与3’UTR相互作用检测

 

交付结果:

*完整的实验报告,包括实验数据,图片,结果分析等