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乙酰化位点鉴定服务

卡梅德生物长期以来一直专注于优化我们的质谱技术平台。我们开发了一条完整的蛋白质鉴定流程,从样品制备、蛋白质分离纯化、质量分析,最后到系统的生物信息学分析。我们的蛋白质鉴定服务采用最新技术和优化方案,成功率接近100%

乙酰化是细胞生物学中蛋白质的重要修饰。N-乙酰化,或乙酰基向氮的转移,通过不可逆和可逆机制发生在几乎所有真核蛋白质中。N-末端乙酰化需要通过甲硫氨酸氨基肽酶 (MAP) 裂解 N-末端甲硫氨酸,然后通过 N-乙酰转移酶 (NAT) 酶将氨基酸替换为来自乙酰辅酶 A 的乙酰基。它作为蛋白质(例如组蛋白、STAT 和微管)的共翻译和翻译后修饰发生。乙酰化修饰调节蛋白质构象,这种修饰的功能障碍已被暗示在许多疾病中,包括癌症。这种类型的乙酰化是共翻译的,因为 N 端在生长的多肽链上被乙酰化,这些多肽链仍然附着在核糖体上。虽然 80-90% 的真核蛋白质以这种方式乙酰化,但其确切的生物学意义仍不清楚。

N-末端乙酰化

 

N-乙酰化,或乙酰基向氮的转移,通过不可逆和可逆机制发生在几乎所有真核蛋白质中。N-末端乙酰化需要通过甲硫氨酸氨基肽酶 (MAP) 裂解 N-末端甲硫氨酸,然后通过 N-乙酰转移酶 (NAT) 酶将氨基酸替换为来自乙酰辅酶 A 的乙酰基。这种类型的乙酰化是共翻译的,因为 N 端在仍然附着在核糖体上的不断增长的多肽链上被乙酰化。虽然 80-90% 的真核蛋白质以这种方式乙酰化,但其确切的生物学意义仍不清楚。

 

赖氨酸乙酰化 - 组蛋白的调节

 

组蛋白 N 末端赖氨酸的 ε-NH2 乙酰化(称为赖氨酸乙酰化)是调节基因转录的常用方法。组蛋白乙酰化是一种可逆事件,可减少染色体凝聚以促进转录,这些赖氨酸残基的乙酰化受包含组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 活性的转录因子的调控。虽然具有 HAT 活性的转录因子充当转录共激活剂,但组蛋白脱乙酰酶 (HDAC) 酶是共阻遏物,通过降低赖氨酸乙酰化水平和增加染色体凝聚来逆转乙酰化作用。虽然乙酰化首先在组蛋白中检测到,但据报道细胞质蛋白也被乙酰化,因此乙酰化似乎在细胞生物学中比简单的转录调节发挥更大的作用。此外,乙酰化和其他翻译后修饰之间的串扰,包括磷酸化泛素化甲基化,可以改变乙酰化蛋白质的生物学功能。

卡梅德生物建立了一个高灵敏度的 HPLC-MS/MS 平台,可以分析多个样品以及真核和原核生物中的乙酰化。

 

服务流程

 

 
1 蛋白乙酰化鉴定流程
主要步骤:

还原和烷基化→胰蛋白酶消化多肽提取脱盐LC MS/MS在肽上匹配来自虚拟消化的乙酰化肽的质量使用MASSCOTNCBISwissProt数据库中的一个物种进行标准数据库搜索

 

客户提供

 

 

样品类型

溶液样品、凝胶样品或IP磁珠

蛋白信息

目的蛋白的氨基酸序列或登录号

蛋白质量

不少于20ug纯化的蛋白质或富含目标蛋白的蛋白混合物(如IP产物)

蛋白浓度

5-20mg/ml

缓冲液

请告知我们您的缓冲液信息

注意

不接受任何存在生物安全隐患的样品

 

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