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重组蛋白昆虫表达服务

卡梅德生物（KMD Bioscience）多年致力于重组蛋白表达与制备研究。我们的科学家拥有丰富的蛋白昆虫细胞蛋白表达、发酵和纯化经验，能够快速为不同客户制定定制化的蛋白昆虫细胞表达策略。

昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作，简称为P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒，P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统适合于膜蛋白的重组表达，4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情，卡梅德生物科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品，更多详情请参考蛋白纯化章节。

昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一，具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点，重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性，如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。相对于哺乳动物细胞蛋白表达系统，蛋白昆虫表达体系所生产的蛋白，糖基化程度偏低。但是昆虫蛋白表达系统的优势在于，利用病毒进行转染，操作相对容易，转染体系容易形成（相对哺乳动物瞬时转染体系）。

卡梅德生物（KMD Bioscience）可以为客户提供整套的蛋白表达方案，我们免费对客户提供的基因进行序列分析检测；同时根据Sf9，Sf21，Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性，免费为您进行密码子优化，从而有效提高重组蛋白表达量。我们的优势还体现在，我们的团队成员具有多年的重组蛋白和抗体的制备经验，我们熟悉不同蛋白的表达特性，如膜蛋白表达，内源性蛋白表达以及分泌性蛋白表达，同时我们GMP/GLP 生产级实验室和严谨的符合临床注册原则的文件记录体系，能为您的蛋白产品保驾护航。

蛋白表达昆虫宿主细胞系：

细胞	来源	用途
Sf9	* 分离自IPLBSF21-AE	* 适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白
Sf21	* 衍生于IPLBSF-21细胞系	* 转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞，如晶体蛋白
Hi5	* 源于白菜尺蠖卵巢细胞，粉纹夜蛾细胞	* 适用于重组病毒颗粒表达，也常用于转染和空斑纯化，且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白
S2	* 来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞，也有双倍体细胞	* 比较适合病毒结构蛋白等重组表达

服务步骤：

步骤	服务内容	周期
亚克隆	* 客户不提供基因模板: 密码子优化，基因合成 * 客户提供质粒：扩增并抽提含有目标基因的载体质粒 * 拼接序列验证：测序 * 交付：正确构建的重组表达质粒及测序原始报告	2周
P1代病毒制备与表达小试	* 重组Bacmid DNA扩大化培养，并转染昆虫细胞制备P1和P2病毒 * P1代病毒滴度测定（滴度10⁶－10⁸），并验证小量蛋白表达 * 交付：实验报告与图片	3–4周
表达优化及测试	* P2病毒扩增，病毒滴度测定（滴度10⁷－10⁹） * P2代病毒转染昆虫细胞，蛋白表达纯化 * SDS-PAGE及WB分析 * 交付：图片，实验报告，纯化好的蛋白产品	3-4周
大规模重组蛋白表达及纯化	* 1L (默认)，5L，10L，30L，80L，130L和250L任选 * 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白 * SDS-PAGE和WB验证蛋白表达	协商

服务优势：

--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--多种融合标签载体和宿主，以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

--多种规模蛋白发酵模式：小规模（500ml，2.5L，10L和30L）、大规模（80L，130L和250 L发酵罐）

--短时间内制备高纯度毫克级，克级重组蛋白

--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系，保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

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