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O-聚糖分析服务

卡梅德生物长期以来一直专注于优化我们的质谱技术平台。我们开发了一条完整的蛋白质鉴定流程,从样品制备、蛋白质分离纯化、质量分析,最后到系统的生物信息学分析。

糖基化是具有挑战性的翻译后修饰之一。它通常具有一组修改而不是单个修改。甚至肽上的单个糖基化位点也具有多个具有不同链长和连接的分支的聚糖异构体。O-聚糖主要通过末端单糖残基与丝氨酸或苏氨酸的OH基团之间的糖苷键与多肽连接。与 N-聚糖不同,O-连接的氨基酸共有序列尚不清楚。O-聚糖在结构上是多样的,可以分为几个具有相对异质核心结构的结构家族。

与 N-聚糖不同,目前还没有通用酶可以消化大多数 O-连接聚糖。O-聚糖酶仅去除未取代的二糖 O-GalNAc 引发的聚糖。化学释放主要是O-聚糖分离的方法。大多数O-聚糖从O-糖肽中释放出来,即β-消除。

O-聚糖分析通常使用 MALDI-TOF MS 进行。有必要通过全甲基化衍生 O-聚糖,以将所有羟基转化为甲基醚,并通过其羧基的甲基酯化来稳定唾液酸。这使 MALDI TOF MS 能够在正模式下分析所有 O-聚糖。将全甲基化的 O-聚糖直接注入质谱仪可以提供有关聚糖组成的信息。

 

3 检测和分析的 O-聚糖结构示例

 

超过 60% 的治疗性蛋白质在生物合成后通过添加 N-聚糖或 O-聚糖进行翻译后修饰。有必要在有效的制造过程中表征聚糖,以保持持续的生物治疗糖基化模式。在卡梅德生物,我们提供 O-聚糖分析服务,以支持治疗性蛋白质的开发和商业化。

 

服务流程

 

--O-连接聚糖通常通过还原性碱性β-消除释放

--释放的 O-聚糖可以通过亲水相互作用色谱 (HILIC) 进行富集,每种聚糖形式的连接可以通过用特定的外切糖苷酶消化来确认

--为了改进基于高效液相色谱 (HPLC) 和 MS 的聚糖分析,释放的聚糖被 2-氨基苯甲酸 (2-AA) 或 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 荧光标记

--标记的 O-聚糖由 IHLIC 富集

--然后通过 MALDI-TOF MS(基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱仪)或 ESI-MS(电喷雾电离质谱仪)检测富集的 O-聚糖

 

客户提供

 

蛋白质

至少100ug

细胞

至少1×10^7个

动物组织

至少1g

植物组织

至少200mg

抗凝血 (EDTA)

至少1ml

血清

血清0.2-0.5ml

尿液

至少2ml

微生物样品

干重不低于200mg

 

服务优势

 

--高灵敏度、可重现的 O-聚糖模式

--相对较快的周转时间

--O-聚糖的高覆盖率

--处理复杂的生物基质,如细胞和组织

--详细报告包括实验程序、液相色谱和质谱仪参数、MS 原始数据文件、O-聚糖分析结果和生物信息学分析

 

如何订购?

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-400-621-6806或发送邮件至info@kmdbioscience.com