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重组蛋白昆虫表达服务

  

 

 

 

卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年致力于重组蛋白表达与制备研究。我们的科学家拥有丰富的蛋白昆虫细胞蛋白表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户制定独具特色的蛋白昆虫细胞表达策略。

昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作,简称为P1P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒,P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统非常适合于膜蛋白的重组表达,4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情,卡梅德生物科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,更多详情请参考蛋白纯化章节

昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一,具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点,重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。相对于哺乳动物细胞蛋白表达系统,蛋白昆虫表达体系所生产的蛋白,糖基化程度偏低。但是昆虫蛋白表达系统的优势在于,利用病毒进行转染,操作相对容易,转染体系容易形成(相对哺乳动物瞬时转染体系)。

卡梅德生物KMDTM Bioscience)可以为客户提供整套的蛋白表达方案,我们免费对客户提供的基因进行序列分析测;同时根据Sf9Sf21Hi-5S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。我们的优势不仅限于此,我们的团队成员具有多年的重组蛋白和抗体的制备经验,我们熟悉不同蛋白的表达特性,如膜蛋白表达,内源性蛋白表达以及分泌性蛋白表达,同时我们GMP/GLP 生产级实验室和严谨的符合临床注册原则的文件记录体系,能为您的蛋白产品保驾护航。

 

蛋白表达昆虫宿主细胞系

 

细胞

来源

用途

Sf9

分离自IPLBSF21-AE

适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白

Sf21

衍生于IPLBSF-21细胞系

转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞,如晶体蛋白。

Hi5

源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾细胞

适用于重组病毒颗粒表达,也常用于转染和空斑纯化,且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白

S2

来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞,也有双倍体细胞

比较适合病毒结构蛋白等重组表达

 

服务步骤

 

步骤

服务内容

周期

亚克隆

*客户不提供基因模板: 密码子优化,基因合成

*客户提供质粒:扩增并抽提含有目标基因的载体质粒

*拼接序列验证:测序

*交付:正确构建的重组表达质粒及测序原始报告

2

P1代病毒制备与表达小试

*重组Bacmid DNA扩大化培养,并转染昆虫细胞制备P1P2病毒

*P1代病毒滴度测定(滴度106108),并验证小量蛋白表达

交付:实验报告与图片

34

表达优化及测试

*P2病毒扩增,病毒滴度测定(滴度107109

*P2代病毒转染昆虫细胞,蛋白表达纯化

*SDS-PAGEWB分析

交付:图片,实验报告,纯化好的蛋白产品。

3-4

大规模重组蛋白表达及纯化

* 1L (默认)5L10L30L80L130L250L任选

- 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

*SDS-PAGEWB验证蛋白表达

协商

 

 

我们的服务优势

--密码子优化:包含稀有密码子分析,蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--多种融合标签载体和宿主,以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

--多种规模蛋白发酵模式:小规模(500ml2.5L10L30L)、大规模(80L,130L250 L发酵罐)

--短时间内制备高纯度毫克级,克级重组蛋白

--低内毒素:LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系,保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

 

 

如何订购?

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-022-8216-4980/156-0119-0182或发送邮件至info@kmdbioscience.com