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重组蛋白昆虫表达服务

  

 

 

 

卡梅德生物(KMD Bioscience)多年致力于重组蛋白表达与制备研究。我们的科学家拥有丰富的蛋白昆虫细胞蛋白表达发酵纯化经验,能够快速为不同客户制定定制化的蛋白昆虫细胞表达策略。

昆虫细胞表达重组蛋白涉及两代病毒的制备工作,简称为P1P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表达预实验以及扩增P2代病毒,P2代病毒用于大规模蛋白表达制备服务。昆虫细胞蛋白表达系统适合于膜蛋白的重组表达,4次及以下跨膜蛋白几乎可以有效地在昆虫细胞中进行表达和纯化。膜蛋白的纯化是一件比较耗时耗力的事情,卡梅德生物科技可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,更多详情请参考蛋白纯化章节

昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一,具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点,重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。相对于哺乳动物细胞蛋白表达系统,蛋白昆虫表达体系所生产的蛋白,糖基化程度偏低。但是昆虫蛋白表达系统的优势在于,利用病毒进行转染,操作相对容易,转染体系容易形成(相对哺乳动物瞬时转染体系)。

卡梅德生物(KMD Bioscience)可以为客户提供整套的蛋白表达方案,我们免费对客户提供的基因进行序列分析测;同时根据Sf9Sf21Hi-5S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。我们的优势还体现在,我们的团队成员具有多年的重组蛋白和抗体的制备经验,我们熟悉不同蛋白的表达特性,如膜蛋白表达,内源性蛋白表达以及分泌性蛋白表达,同时我们GMP/GLP 生产级实验室和严谨的符合临床注册原则的文件记录体系,能为您的蛋白产品保驾护航。

 

蛋白表达昆虫宿主细胞系:

 

细胞

来源

用途

Sf9

* 分离自IPLBSF21-AE

* 适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白

Sf21

* 衍生于IPLBSF-21细胞系

* 转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞,如晶体蛋白

Hi5

* 源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾细胞

* 适用于重组病毒颗粒表达,也常用于转染和空斑纯化,且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白

S2

* 来源于果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞,也有双倍体细胞

* 比较适合病毒结构蛋白等重组表达

 

服务步骤:

 

步骤

服务内容

周期

亚克隆

* 客户不提供基因模板: 密码子优化,基因合成

* 客户提供质粒:扩增并抽提含有目标基因的载体质粒

* 拼接序列验证:测序

* 交付:正确构建的重组表达质粒及测序原始报告

2周

P1代病毒制备与表达小试

* 重组Bacmid DNA扩大化培养,并转染昆虫细胞制备P1和P2病毒

* P1代病毒滴度测定(滴度106-108),并验证小量蛋白表达

* 交付:实验报告与图片

3–4周

表达优化及测试

* P2病毒扩增,病毒滴度测定(滴度107-109

* P2代病毒转染昆虫细胞,蛋白表达纯化

* SDS-PAGE及WB分析

* 交付:图片,实验报告,纯化好的蛋白产品

3-4周

大规模重组蛋白表达及纯化

* 1L (默认),5L,10L,30L,80L,130L和250L任选

* 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白

* SDS-PAGE和WB验证蛋白表达

协商

 

 

服务优势:

 

--密码子优化:包含稀有密码子分析,蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

--多种融合标签载体和宿主,以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

--多种规模蛋白发酵模式:小规模(500ml2.5L10L30L)、大规模(80L,130L250 L发酵罐)

--短时间内制备高纯度毫克级,克级重组蛋白

--低内毒素:LAL检测法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撑体系,保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

 

如何订购?

 

如果您对我们的服务项目感兴趣,请直接拨打热线电话:+86-400-621-6806或发送邮件至info@kmdbioscience.com