卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于抗体发现领域研究。获得杂交瘤单克隆抗体序列信息是进行抗体重组改造，抗体药物发现的基础，而抗体的Fab片段则是抗体重组改造的主要区域。我们积累了丰富的抗体文库构建经验，能够为客户提供基于抗体噬菌体展示文库技术的人源Fab抗体文库构建服务。
抗体片段Fab简介：
Fab片段是抗体结构中可以与抗原结合的区域，也叫做抗原结合片段，涉及到抗体-抗原结合的亲和力，抗体特异性等特征。抗体Fab片段含有1个可变区(V区)和1个恒定区（C1），V区含有3个互补决定结构域（CDR），涉及到独特型抗体的产生，抗体的超频突变，尤其是CDR3结构域是抗体工程改造的核心区域；C1区主要起结构支撑作用。Fab抗体可以通过酶解法进行制备。
抗体文库制备服务 – 人源Fab抗体库构建服务：
构建Fab抗体文库是获得高质量，高亲和力药物抗体的有效途径之一，高库容量（109-1012）的噬菌体展示Fab抗体文库提高了抗体工程改造速度，如重组人单克隆抗体，嵌合抗体的制备速度。
---Fab抗体库设计理念
噬菌体展示Fab抗体文库的核心在于提高独立噬菌体展示克隆的数量，在卡梅德生物的实验室中，我们的科学家努力将抗体的可变区（VH和VL）基因，尤其是CDR区域（互补决定区）采用不同的策略和方式，如氨基酸突变，移码读框等形成数目较大的独立克隆。此外我们设计了一套方案：在体外对人外周血单核细胞进行敏化处理后，通过流式分选技术分离出高亲和力的单核细胞，进行EBV单克隆化处理，利用该方法能够获得高度一致性的单核细胞克隆，再进行文库建设。
---噬菌体宿主体系选择
卡梅德生物拥有M13，T4和T7噬菌体展示系统，根据客户的项目需求（展示的蛋白或抗体片段的大小等参数），我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。
人源Fab抗体文库构建项目流程：
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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外周血单核细胞单克隆化 |
* 获取外周血单核细胞 * 单核细胞敏化 * EBV病毒单克隆化 * 流式细胞分选后单克隆培养 |
8-12周 |
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抗体cDNA制备 （客户可以提供细胞） |
* 总RNA提取 * 高保真RT-PCR制备cDNA * 系统对照：Actin特异引物PCR扩增，以鉴定逆转录产品cDNA质量 |
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构建Fab抗体库 |
* 引物设计与合成：抗体可变区兼并引物设计、合成 * 以cDNA为模板，PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因 * scFv基因拼接 * 噬粒构建与转化：酶切、连接scFv和噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库 * 鉴定：随机挑选20-50个克隆，PCR鉴定阳性率，测序和分析抗体序列 * 包装，＞1⨯1013噬菌体颗粒/ml |
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交付 |
* 构建报告，包括详细建程序，代表性序列信息 * 产品交付：细菌和噬菌体两种形式抗体库 |
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注 ：1.客户提供人外周血淋巴细胞，淋巴结细胞或脾脏细胞（保存在RNA later等溶液中，避免RNA降解，蓝冰运输），从第二步开始制备Fab抗体文库，只需8-9周即可完成。
2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物，干冰运输。
人源Fab抗体文库构建技术流程：
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服务优势：
--免疫，合成抗体噬菌体文库构建
--周期短：预制抗体文库筛选服务
--严谨完整的QC标准
--高库容量：独立克隆数107 - 1012
--个性化的文库淘筛策略
--高亲和力抗体制备：10-7-10-13
--多种噬菌体展示系统：M13，T4，T7
--完整的上下游服务：提供从抗体制备、抗体测序，抗体标记修饰，到抗体人源化等一站式技术服务，节约客户宝贵时间和经费
--服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求
如何订购？
如果您对我们的服务项目感兴趣，请直接拨打热线电话：+86-400-621-6806或发送邮件至info@kmdbioscience.com
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