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人源抗体噬菌体文库制备服务

卡梅德生物科技搭建了先进的噬菌体抗体展示文库构建平台,利用该平台我们的科学家可以为客户提供不同级别,不同物种的抗体噬菌体展示文库。


抗体文库制备服务 – 人源抗体噬菌体展示文库制备
噬菌体展示技术(phage displayed technology)是指利用共表达方式,将外源蛋白基因,如抗体片段、多肽片段等的cDNA连接在噬菌体表面结构蛋白基因VIII或基因III上进行菌体外展示表达。该技术是由Smith,G.P在1985年提出,通过吸附-洗脱-扩增的重复过程,将含有靶蛋白噬菌体从表达各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来,然后进行富集、扩增及基因序列测定,推断外源蛋白的氨基酸组成。天然人源抗体是指收集未经免疫的人源外周血淋巴单核细胞,进行一系列的基因克隆,将抗体的CDR区域克隆拼接到噬菌体衣壳蛋白基因上进行展示,通过重复吸附-洗脱-扩增等过程,将含有高特异性和高亲和力抗体片段的噬菌体从噬菌体库中筛选出来,然后进行富集、扩增及基因重组构建单克隆抗体,如下图所示。

 

卡梅德生物拥有M13,T4和T7噬菌体展示体系,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),会采用不同的噬菌体进行蛋白或者抗体的展示。在已完成的案例中,基于M13噬菌体pIII基因展示体系较为常用,构建的库容量可以达到1011,其中有效库容量为109同时,客户也可以提供抗原,进行体外外周血淋巴单核细胞敏化,以获得更高亲和力和特异性的单克隆抗体,通常基于该方法制备的抗体亲和力能达到10-13 M级别。

 

噬菌体抗体展示文库平台特征:

*可溶抗原的快速制备能力:结合公司现有的重组蛋白表达体系,我们能够在短时间内制备出高纯度、高生物学活性的可溶抗原蛋白,用以支持噬菌体抗体的免疫及筛选工作。

*成熟稳定的免疫文库构建技术:目前我们获得的噬菌体一级免疫文库的库容可高达108 ~ 109,序列丰度超过99%,获得的抗体亲和力达到nM甚至pM级别。

*快速可靠的候选抗体筛选及初步鉴定技术:根据不同的抗体药物功能需求,开发了多种筛选体系,包括直接筛选法、竞争法、负筛选发、细胞筛选法等。