1.纳米抗体介绍

纳米抗体(nanobody, Nb)仅由两条重链构成，其重链的可变区称为VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)，通过体外重组表达制备的VHH 分子质量仅仅为15kDa，是传统抗体的十分之一左右，是抗原结合片段（scFV，VH-VL）的二分之一左右。

由于没有轻链，纳米抗体仅有3个属于重链的抗原识别区域（CDRs 区）。为了弥补缺少的轻链CDRs的生物学活性，纳米抗体在 CDR3部分增加了氨基酸长度（16~18个氨基酸残基，对应的传统抗体的CDR3有8-15个氨基酸），以增加CDR的多样性和特异性。

图1：纳米抗体的结构图

2.纳米抗体的表达和纯化策略

不同于经典的杂交瘤技术制备单克隆抗体，纳米抗体开发的整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。羊驼免疫后，从羊驼外周血分离B淋巴细胞，提取总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板PCR扩增获得多样化的纳米抗体基因片段，然后将其连接到载体上，从而构建噬菌体文库。随后进行多轮淘洗步骤获得抗原特异性纳米抗体，并对其进行测序、表达和验证。

图2：纳米抗体的制备流程

卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系进行抗体表达，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系，配合卡梅德设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列）进行重组抗体表达与制备。表达完成后，纳米抗体过镍柱进行纯化。再将纯化好的纳米抗体进行Biacore亲和力检测。

图3：Fc-VHH纳米抗体表达结果图片

3. 纳米抗体的应用

纳米抗体由于分子量小，是单一基因编码，容易进行基因工程改造，并且可以通过短小的连接序列聚合多个纳米抗体，形成多价或者是多特异的抗体结构。纳米抗体容易和其他结构(如BSA、IgG-Fc等)形成新的融合分子。在新的融合分子中，纳米抗体与其靶抗原定向结合，与纳米抗体融合的部分就能发挥相应的功能，因此可以与其他药物联用，或者是应用于诊断和充当多种领域的实验研究工具，应用场景广阔。

卡梅德生物致力于为客户提供高质量的纳米抗体定制服务。作为领先的生物技术公司，我们拥有专业的团队和先进的技术平台，能够根据客户的需求，定制设计具有高亲和性和特异性的纳米抗体。我们的定制服务涵盖了从抗原免疫动物、抗原制备到纳米抗体的筛选与生产的整个过程。无论是针对特定抗原的定制纳米抗体制备，还是针对特定应用场景的定制化功能改造，我们都能够提供个性化的解决方案。通过我们的专业技术和严格的质量控制体系，我们保证为客户提供高质量、高效率的纳米抗体定制服务，帮助客户加速科研和产品开发进程，实现研究目标的达成。