1. 制备单抗还是多抗该如何选择？

答：

如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择制备单克隆抗体。 若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测，可以选择制备多克隆抗体。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制备困难，建议制备单抗。多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点，在一些情况下也是一种选择。在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。

2. B细胞培养在多大的孔板中培养？

答：

在96孔板进行培养。

3. 制备单克隆抗体，提供蛋白抗原，样品有什么要求？

答：

分子量大于10kDa，B纯度>85%，浓度不低于0.5mg/ml，最好1–5mg/ml之间的可溶性蛋白。不应含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。质量大于3mg 必须提供如下信息：A SDS-PAGE检测图，清楚标示样品上样量，Marker上样量，和各自的浓度。 最好提供如下信息： WB检测图。

4. 动物对抗原产生过度免疫反应如何解决？

答：

调整抗原的剂量和免疫频率，使用合适的免疫佐剂，并监测动物的免疫反应以确保其健康。

5. 单个B细胞筛选后，抗体是如何组装的，如何设计它的重链和轻链引物？

答：

分别从单个B细胞中扩出抗体的重轻链基因，共表达转染细胞。引物可以通过germline基因序列来设计。

6. 单克隆细胞稳定性差如何解决？

答：

定期检测单克隆细胞的稳定性，选择稳定的单克隆细胞进行扩增和抗体生产。

7. 抗体样品可能受到污染或包含杂质。

答：

使用适当的纯化技术，例如亲和层析或凝胶过滤，以提高抗体样品的纯度。

8. B细胞大概培养多久可以用于ELISA检测，抗体量会达到多少？

答：

B细胞培养10-12天可用于ELISA检测，抗体量在0.2 μg/mL ~ >10 μg/mL。

9. 单个B细胞技术会成为治疗性抗体开发的金标准吗？

答：

虽然单个B细胞技术逐渐成为抗体开发的主流技术之一，但是抗体开发的技术路线仍然有很多种，如杂交瘤和噬菌体展示等，这些方法各有优缺点，相互之间是互补关系。

10. 单个B细胞直接裂解后与培养后的PCR成功率哪个更高？

答：

单个B细胞培养后的PCR成功率更高。培养后的B细胞经过扩增，细胞数增加，模板量更高。