2024-02-27 阅读(202)
1.羊驼单B细胞技术原理
羊驼产生两种类型的抗体:(i) 由重链和轻链二聚体组成的常规抗体,以及 (ii) 一类只具有重链不含轻链,被称为重链抗体(heavy Chain Antibody,hcAb)。如图1中D所示,羊驼重链抗体缺少轻链,由4个HC和2个VH组成,其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体(single domain antibody,sdAb)。和传统抗体相比,羊驼抗体具有稳定性高、易于进行基因改造,免疫原性弱,特异性强,亲和力高,在真核或者原核系统中表达量高等众多优点。并因其与人抗体重链氨基酸序列高度相似,更易于进行人源化改造,在当前的抗体药研究领域中应用广泛。
图1 A,传统IgG;B,传统抗体Fab片段;C,传统抗体的单链Fv片段;D,重链抗体或驼类抗体;E,驼类抗体的VH区域或单域抗体(sdAb)
单B细胞单抗制备技术是近些年来新兴的一种抗体制备技术。卡梅德生物利用此技术,从羊驼外周血或免疫器官中提取淋巴细胞,通过分选技术鉴定和分离出特定的B细胞后将其进行单细胞培养,使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性,通过PCR技术扩增出特异性抗体基因,将其克隆到表达载体中,并在指定的系统中进行表达,纯化好的抗体通过ELISA等方法进行表达验证。卡梅德生物利用单B细胞单抗制备技术获得的抗体品质出众,且成功率高。
2. 羊驼单B细胞技术抗体制备流程
①抗原制备。半抗原改造或完全抗原制备。
②动物免疫。抗原乳化,免疫羊驼4-5次;ELISA效价测定;抗血清采集。
③B细胞富集和筛选。PBMC分离;FACS Assay、ELISA Assay。④B细胞抗体测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR,来扩增其抗体可变区基因,然后进行高通量测序。
⑤载体构建、抗体表达纯化。抗体小规模转染或放大。
3. 单B细胞单抗制备优势
类目 |
单B细胞技术 |
杂交瘤技术 |
噬菌体展示技术 |
抗体 |
天然 |
天然 |
非天然 |
抗体亲和力 |
高 |
高 |
中等 |
可成药性 |
高 |
高 |
低 |
时间 |
16~20周,可选快速免疫 |
20~26周,可选快速免疫 |
16~20周,可选快速免疫 |
抗体基因序列 |
直接获得 |
需要进一步测序 |
直接获得 |
抗体多样性 |
高 |
中等 |
中等 |
所能筛选的种属 |
不限种属 |
鼠、兔 |
不限种属 |
单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体,直接获取完整的单一来源抗体,该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性,并且能够直接获得抗体基因序列。
4. 羊驼单B细胞应用
羊驼单B细胞单抗通常广泛应用于以下4个方面:
①药物研发。抗体能够被用于新药物的研发,尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。
②疫苗研制。羊驼单B细胞单抗能够被用于提高疫苗的效力和特异性。
③免疫疗法。羊驼单B细胞单抗可以用于免疫治疗,能够为消费者提供更加个性化的治疗。
④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性,能够用于解析生物学过程和疾病机制。
卡梅德生物以其专业的技术团队和先进的实验设备,致力于提供高质量的羊驼单B细胞单抗制备服务。我们采用先进的技术和精密的实验操作,针对客户需求,精准设计实验方案,确保获得高亲和力、高特异性的单克隆抗体。羊驼单B细胞单抗具有小型化、高亲和力和稳定性的特点,适用于生物医药、生命科学等领域的多种应用,如免疫组化、免疫印迹、免疫沉淀等。作为您的合作伙伴,我们将为您提供定制化的解决方案,为您的科研项目和应用需求提供可靠的支持,助您取得更多的科研成果和商业价值。