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重组抗体表达是高亲和力抗体及人源化抗体筛选、抗体扩大生产和抗体下游功能验证等一系列重要靶点抗体研发过程中的关键环节,也是单抗药物产业化的关键技术。同时,重组抗体表达也解决了通过杂交瘤技术获得的单克隆杂交瘤细胞株可能会因细胞污染、细胞株保存不当等导致的优质单克隆抗体丢失问题,我们只需要将杂交瘤细胞进行测序,获得单克隆抗体的基因序列,通过重组表达的方式生产所需抗体。重组抗体广泛应用于免疫诊断、ELISA试剂盒开发、免疫学检测、生物标志物识别、治疗性抗体等领域。
图1 噬菌体展示结合哺乳动物表达的人源化兔IgG
卡梅德生物(KMD Bioscience)基于成熟的蛋白表达平台建立了完善的重组抗体制备生产体系,拥有原核表达体系(包括但不限于BL21、Nissle 1917、Rosetta等多个原核表达宿主体系)、哺乳表达体系(包括但不限于Expi 293F、freestyle 293F、CHO-S、CHO-K1、293T等多个哺乳宿主体系)、酵母表达体系(包括但不限于GS115、X33等毕赤酵母表达体系和酿酒酵母表达体系)等多个适合抗体表达的体系,并且每个表达体系均有配套的卡梅德生物自主设计的可溶性高表达载体,能够为客户提供包括但不限于VHH、scFv、Fab、各种种属(包括但不限于人源、鼠源、兔源等多个种属的抗体以及嵌合抗体、人源化抗体等)和各种亚型的IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等)以及各种类型的抗体融合蛋白(包括单链抗体融合蛋白、VHH融合蛋白等)等的重组抗体制备服务。同时,借助GMP/GLP发酵平台和多个规格的体系(包括但不限于5L,10L,30L,80L,130L和250L等多个发酵体系),卡梅德生物能够为客户提供不同表达产量(最高产量可达5g/L水平)的高质量重组抗体表达服务。
卡梅德生物能够提供从序列分析(包括跨膜分析,亲水性分析等)、标签设计(包括但不限于亲和标签、促溶标签、生物素化标签等)、linker设计、载体构建设计、重组抗体表达到抗体纯化一站式重组抗体表达服务。同时,卡梅德生物还能提供抗体标记、亲和力验证、ELISA验证、流式验证、免疫学检测、药物抗体筛选等配套的下游检测和验证实验。客户只需要告知抗体序列和项目需求,卡梅德的科学家能够针对客户的项目设计出定制化的项目方案,为客户的科研项目提供有力的技术支持。
服务流程:
步骤 |
服务内容 |
周期 |
载体构建 |
序列分析设计+密码子优化+基因合成+载体构建 |
2-3周 |
重组抗体原核表达 |
表达菌株转化+3-5个克隆表达鉴定(SDS-PAGE)+抗体放大(1.5L体系) |
2-3周 |
重组抗体哺乳表达 |
无内毒素质粒准备+哺乳动物细胞转染(200ml体系)+抗体表达验证(SDS-PAGE,WB) |
2-3周 |
重组抗体酵母表达 |
转化毕赤酵母/酿酒酵母+20个克隆表达鉴定(PCR鉴定)+3-5个阳性克隆进行抗体表达+抗体表达放大(1L) |
6-8周 |
抗体纯化 |
镍柱纯化/Protein A/G纯化等 |
1周 |
交付 |
表达载体1支、表达菌株1支(原核/酵母)、重组蛋白,纯度>85%(SDS-PAGE) |
/ |
卡梅德生物可以提供:
表达体系 |
表达抗体类型 |
宿主体系 |
原核表达体系 |
VHH及VHH融合蛋白或各类标签、scFv及scFv融合蛋白或各类标签,人源化单链抗体等 |
BL21、Nissle 1917、Rosetta等 |
哺乳表达体系 |
VHH及VHH融合蛋白或各类标签、scFv及scFv融合蛋白或各类标签、各种种属IgG、各种种属Fab、人源化抗体、嵌合抗体等 |
Expi 293F、freestyle 293F、CHO-S、CHO-K1、293T等 |
酵母表达体系 |
VHH及VHH融合蛋白或各类标签、scFv及scFv融合蛋白或各类标签,人源化单链抗体等 |
GS115、X33等 |
注:卡梅德生物可以提供标签选择、linker设计、载体构建和宿主选择等分析服务,如有需求请联系我们。
项目案例:
图2:VHH1融合Fc |
图3:VHH2融合Fc |
重组抗体制备服务优势:
--详细的个性化定制方案(包括序列分析和方案设计)
--多种标签可以选择:亲和标签、促溶标签、生物素化标签等
--各类配套的下游验证实验:抗体标记、亲和力验证、ELISA验证、流式验证等
--多种种属的重组抗体制备:包括人源,鼠源,兔源,羊源等
--多种类型的重组抗体表达:VHH、scFv、Fab、IgG、嵌合抗体、人源化抗体、抗体融合蛋白等
--多个表达体系可供选择:原核体系、哺乳体系、酵母体系等
--配套的自主设计的可溶性高表达载体
--多重表达模式:稳定表达和瞬时表达
--低内毒素水平:LAL检测法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撑体系,保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯
--多个规格的体系:5L,10L,30L,80L,130L和250L等多个发酵体系
--多个纯化体系:镍柱纯化、Protein A/G纯化、分子筛等多种纯化体系
重组抗体的优势:
--重组单克隆抗体基因序列确定,抗体批次间差异小,重复性好
--重组抗体能够实现抗体的大量制备,可无需使用动物
--可以进行抗体工程改造:重组抗体可以进行重组改造,如抗体片段表达、嵌合抗体、抗体人源化等
--设计重组抗体融合蛋白满足各类项目研究需求
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