卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于抗体领域研究。我们积累了丰富的抗体发现经验，能够为客户提供基于抗体噬菌体展示文库技术的single-chain Fv（scFv）抗体文库构建服务。单链抗体（scFv）具有分子量小，组织穿透力强，易于进行基因工程改造等优点。卡梅德生物利用抗体噬菌体展示文库技术，可以制备得到高亲和力，结构稳定的scFv抗体。
人源scFV抗体库构建：
噬菌体展示抗体文库被广泛应用于高亲和力抗体的筛选工作，如血管生成标志物纤连蛋白，肿瘤特异性B3/B4抗原，EGFR等蛋白特异性高亲和力抗体的筛选。通过噬菌体展示技术构建的抗体文库通常来源于RT-PCR扩增外周血单核细胞，脾细胞，骨髓细胞和扁桃体来源的mRNAs形成cDNA片段，将这些基因片段拼接到噬粒载体，再转入噬菌体形成共价结构蛋白表达和体外展示。抗体重链和轻链独立自由表达，然后随机地组合，形成噬菌体克隆数达到1011-1012的庞大抗体库。
图1 噬菌体展示技术
Single-chain Fv（scFv）抗体文库是指将抗体的可变区（VH和VL）基因，尤其是CDR区域（互补决定区）采用不同的策略和方式，如氨基酸突变，移码读框等形成数目庞大的不同克隆，并从这些克隆中筛选出针对目的抗原的高亲和力单链Fv抗体。研究表明，抗体可变区的CDR3的多样性直接决定了抗原特异性和结合亲和力，并且CDR3-FR（frame region）组合的多样性决定了抗体经历何种方式的亲和成熟过程。
我们采用错误倾向性PCR，巢式PCR等技术构建达到108-109CFU库容量的一级文库。相比Fab 抗体文库，由于scFv抗体分子量更小，约25kDa，scFV抗体更加稳定，也不容易形成多聚体。
噬菌体宿主体系：
卡梅德生物科技噬菌体展示平台拥有M13，T4和T7噬菌体系列，根据客户的项目需求（展示的蛋白或抗体片段的大小等参数），我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。在我们完成的案例中，基于M13噬菌体pIII基因展示体系较为常用，构建的库容量可以达到1011，其中有效库容量为109。
同时，客户也可以提供抗原，我们进行体外外周血淋巴单核细胞敏化，从而获得更高亲和力和特异性的单克隆抗体，通常基于该方法制备的抗体亲和力能达到10-13M级别。
人源scFV抗体库构建项目流程：
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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抗体cDNA制备 |
* 总RNA提取 * 高保真RT-PCR制备cDNA * 系统对照：Actin特异引物PCR扩增，以鉴定逆转录产品cDNA质量 |
8-9周 |
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构建scFV抗体库 |
* 引物设计与合成：抗体可变区兼并引物设计、合成 * 以cDNA为模板，PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因 * scFv基因拼接 * 噬粒构建与转化：酶切、连接scFv和噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库 * 鉴定：随机挑选20-50个克隆，PCR鉴定阳性率，测序和分析抗体序列 * 包装，＞1x1013噬菌体颗粒/ml |
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交付 |
* 构建报告，包括详细建程序，代表性序列信息 * 产品交付：细菌和噬菌体两种形式抗体库 |
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服务优势：
--免疫，天然和合成抗体噬菌体文库构建
--周期短：预制抗体文库筛选服务
--严谨完整的QC标准
--高库容量：独立克隆数107-1012
--高通量筛选与灵活，个性化的文库淘筛策略
--高亲和力抗体制备：10-7-10-13
--多种噬菌体展示系统：M13，T4，T7
--完整的上下游服务：提供从抗体制备、抗体测序，抗体标记修饰，到抗体人源化等一站式技术服务，节约客户宝贵时间和经费
--服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求
技术流程：
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