卡梅德生物科技（天津）有限公司
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哺乳动物蛋白表达系统适用于科学家对天然构象蛋白的体外重组表达需求，如糖基化修饰，磷酸化修饰等；利用哺乳动物蛋白表达系统，经过高密度发酵技术培养，卡梅德生物的科学家可以做到高达6.3g/L表达水平的重组抗体发酵，适合于重组单抗药物的高水平表达。我们的细胞培养人员均经过严格的GMP体系培训和质量控制体系培训，可为客户提供可追溯的蛋白表达与制备文件记录。
卡梅德生物已建立了完善的重组蛋白哺乳表达体系，包括但不限于FreeStyle 293-F 细胞系、Expi 293-F细胞系、Expi-CHO-K1和Expi CHO-S等细胞系，配合卡梅德设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列），能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。全套GE提供的纯化填料和设备、规模化发酵、一次性细胞发酵工厂进行细胞培养和蛋白表达制备、可批量为客户提供高质量重组蛋白，该技术平台发酵与转化一次性完成，周期大大缩短。
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类型 |
定义 |
优点 |
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瞬时表达系统 |
外源片段不能随细胞分裂而一同复制，导致表达时时间比较短暂，载体DNA随细胞分裂而逐渐丢失。 |
实验周期短，操作简捷。 |
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稳定表达系统 |
外源⽚段整合⼊细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。 |
目的蛋白的表达持久、稳定。 |
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诱导表达系统 |
目的基因的转录受外源小分子诱导后才得以开放。 |
采用异源启动子、增强子和可扩增的遗传标记，可提高蛋白产量。 |
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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基因克隆及载体构建 |
* 扩增/鉴定基因片段或合成目的基因，插入哺乳动物细胞表达质粒 * PCR及测序检测确定亚克隆基因 * 交付：表达载体，克隆菌株，治理构建QC |
2-3周 |
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瞬时蛋白表达 |
* 重组质粒转染细胞(293F， CHO) ：瞬时表达 * SDS-PAGE和WB检测 * 交付：重组蛋白，纯度>85%(SDS-PAGE)，实验报告 |
3-4周 |
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稳定表达 |
* 重组蛋白CHO或293F稳定表达细胞系构建和筛选 * 交付：稳定细胞系，构建报告；边际产物，3个克隆，发酵产物 |
12-14周 |
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小规模蛋白表达 |
* 少量表达及表达条件优化：1L的小规模蛋白表达 * 交付：优化报告，培养条件和全部重组蛋白 |
3-4周 |
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大规模蛋白制备及纯化 |
* 30L，80L，130L和250L发酵罐，以及多种规格细胞工厂（40层*N） * 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白 * 交付：重组蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白 |
5-8周 |
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特殊蛋白表达 |
* 客户提供指定细胞系，卡梅德生物复苏与放大培养 * 定制化微载体悬浮培养技术，适用于贴壁细胞的高密度细胞发酵培养与蛋白表达（细胞数：107/ml） * 细胞工厂化培养 |
协商 |
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CHO细胞系 |
HEK293细胞系 |
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哺乳动物蛋白质生产的主要细胞，适应性强，可在悬浮培养基中高密度生长，并易于适应无血清条件，但其克隆稳定性差。CHO细胞具有不同的谱系：CHO-K1，CHO-S，CHO-DG44和CHO-DXB11。CHO细胞系转染效率低，适用于稳定表达，是开发治疗性蛋白或对治疗性抗体进行商业化重组生产时的首选细胞系。 |
一种产生于人胚芽与肾细胞之间的特殊细胞系，产生了质粒体转染效率较高，且容易培养的优点；该种细胞的另一个衍生株：293T/17的转染效果也较好。该细胞主要缺点是在发育阶段的贴壁能力比较小，而且在试验过程中很易于丧失，进而干扰了试验结果。HEK293转染效率高，适用于瞬时表达，是哺乳动物细胞蛋白瞬时转染的首选细胞系。 |
该系统表达的蛋白和天然蛋白的结构糖基化位置和方式一致，且能够进行多亚基的正确连接。从悬浮培养基或无血清培养基中可获得更高密度，且培养基容积可达1000L以上。哺乳动物细胞产生的内源性杂蛋白少，在信号肽的作用下，表达产物可胞外分泌，方便目的蛋白的分离纯化。
--拥有丰富的重组蛋白哺乳动物重组表达、发酵和纯化经验，能够根据不同客户的需求高效的制定一对一的蛋白哺乳细胞表达策略
--可提供瞬时转染、稳定细胞株构建、重组抗体表达生产等多种表达服务
--拥有一套成熟的载体-细胞-转染高效表达体系，轻松获得抗体的稳定性生产
--完善的哺乳表达体系优化宿主，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line、Expi 293-F和Expi CHO-S等细胞系
--自主设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列），能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备
--多种规格的放大体系供客户选择
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