卡梅德生物科技（天津）有限公司
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酵母表达既具有原核表达操作简单、高效、成本低的特点，又兼具了真核表达能够进行蛋白加工折叠和翻译后修饰等优势。重组蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系统中表达，且能高水平表达，达到5g/L；外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色体上，随染色体复制而不会丢失；酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能，适合活性蛋白表达，容易实现超高密度发酵。
卡梅德生物拥有丰富的重组蛋白酵母表达服务经验，可以为客户提供多种规模的蛋白发酵服务，配合我们完善的蛋白纯化平台，可以在短时间内为客户提供高质量的重组蛋白产品。卡梅德生物拥有完整成熟的酵母表达系统，从基因合成到酵母蛋白表达纯化提供一站式服务，我们有pPICZaA、pGAPZaA、pPIC9K等多种表达载体以及X33、GS115和酿酒酵母等菌株，同时配备多种蛋白表达纯化方法，可以满足客户不同的蛋白表达需求，为客户定制完整的蛋白表达纯化方案。
酵母表达载体选择：
酵母表达载体通常要根据基因的表达目的来进行选择，酵母表达系统载体可分为酵母胞内表达载体和酵母胞外表达载体。酵母胞内表达载体有pGAP系列和pPIC3.5K，酵母胞内表达载体可使目的蛋白在胞内表达，可避免酵母的过度糖基化，适用于在胞浆表达或不含二硫键的非糖基化蛋白，选用酵母胞内表达载体表达水平高但后续的纯化相对复杂；酵母胞外表达载体常见的是pPIC9K，可以使目的蛋白分泌到胞外，纯化相对简单。
卡梅德生物除了提供多种毕赤酵母载体外，还提供酿酒酵母载体，配合大规模发酵，可以提供工业级需求的服务。
酵母表达系统应用场景：
酵母表达系统是一种最经济高效的真核蛋白表达系统，可以成功实现胞内表达或是分泌表达，且其放大培养基相对廉价，培养条件要求不高，适宜工业放大。与哺乳动物细胞表达系统一样，酵母蛋白表达系统能够对所表达蛋白进行例如糖基化、酰基化、脂基化、磷酸基化等保证蛋白天然构象的修饰，可用于制备非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料。利用酵母表达系统人们已经成功地表达了多种生物（包括细菌、真菌、病毒、原生生物、植物、脊椎动物、人类）的许多蛋白质，涉及酶类、蛋白酶体、蛋白酶体抑制物、受体、单链抗体、抗原、调控蛋白等多种蛋白质。在医学领域，酵母表达系统已经成功地应用于基因工程疫苗制备、基因工程药物制备（如抗体药物、蛋白质药物）和蛋白质功能研究等。
蛋白酵母分泌表达步骤和周期：
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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酵母表达载体构建 |
密码子优化，基因合成（或基因模板扩增） |
1-2周 |
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将目的基因亚克隆至合适的载体 |
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拼接序列验证：测序 |
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交付：构建正确的重组表达质粒、菌株及测序原始报告 |
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菌株转化 |
选择合适的菌株进行转化 |
2周 |
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培养6-10个阳性克隆进行重组蛋白的诱导表达 |
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SDS-PAGE检测 |
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交付：阳性克隆菌株、表达筛选结果报告 |
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酵母表达菌株筛选 |
检测重组蛋白表达情况（适用于多拷贝数和高表达菌株） 交付：阳性克隆菌株、表达筛选结果报告 |
2周 |
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菌株表达优化 |
优化培养条件（培养基、菌液OD值、甲醇浓度、诱导温度及时间等），提高目的蛋白的产量 |
2周 |
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小规模蛋白表达及纯化 |
1L发酵液纯化表达的重组蛋白并进行SDS-PAGE检测 |
2-3周 |
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交付：重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。纯度>85% |
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大规模蛋白表达及纯化 |
80L、130L、250L和500L发酵罐 |
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增值服务 |
通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量 蛋白质N端测序：PPSQ31（Edman降解法测序仪） |
1-2周 |
酵母表达实验流程：
服务优势：
--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析
--分泌蛋白表达，接近天然构象的重组蛋白
--多种规模蛋白发酵模式：小规模（500ml、10L）和大规模（80L、130L、250L和500L发酵罐）
--高纯度毫克级，克级重组蛋白；稳定的批间一致性
--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撑体系，保证实验信息可追溯
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