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卡梅德生物科技(KMD Bioscience)多年来致力于重组蛋白表达与纯化的相关研究,每年可完成上百组蛋白的表达与纯化服务,建立了完善的蛋白纯化体系,可根据客户的不同需求提供多元化的蛋白纯化方案。卡梅德生物可以为客户提供一对一的个性化方案定制,根据蛋白性质设计亲和纯化、离子交换、分子筛、疏水层析等多种蛋白纯化实验方案,可纯化有/无标签的重组蛋白和多种种属组织中的天然蛋白并获得高标准和高纯度的目标蛋白质,以满足客户的项目需求,为客户的下游实验研究提供强有力的支持。
重组蛋白纯化服务:
重组蛋白分离纯化一般分为三种:含标签的重组蛋白纯化、不含标签的重组蛋白纯化以及包涵体变性与复性纯化。
含标签的重组蛋白纯化:组氨酸标签(His-tag)是使用范围较为广泛的一种蛋白纯化标签,其纯化的原理是组氨酸残基上的咪唑基团可与层析介质中的金属离子螯合,再通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱达到纯化效果,这种纯化标签的优点在于His-Tag的分子质量非常小且几乎不会对目的蛋白本身的生物学功能及特性产生影响,因此带有His-Tag的蛋白纯化后可直接作为抗原免疫动物制备抗体并不会影响抗体的特异性。卡梅德生物还提供其他多种类型标签的重组蛋白纯化服务,如GST-Tag、SUMO-Tag、MBP-Tag等。
图1 6xHis标签和Ni-NTA相邻残基之间的相互作用
不含标签的重组蛋白纯化:不含纯化标签的重组蛋白我们会根据客户的样品及需求全面分析蛋白性质,结合分子筛、离子柱、疏水色谱,综合制定纯化方案,一般会采用抗体亲和纯化方法,利用靶向配体能与目的蛋白特异性结合的特性将目的蛋白分离出来;或选用分子筛进行分离纯化。
包涵体变性与复性纯化:将以包涵体形式存在的蛋白进行变复性操作,根据蛋白质不同的性质,可以选择尿素、盐酸胍、去垢剂、极端pH等,以保证获得单体状态的变性蛋白。
卡梅德生物提供的重组蛋白分离纯化流程:
步骤 |
服务内容 |
周期 |
Step1 纯化前检测与纯化小试 |
* SDS-PAGE检测蛋白情况 * 小体积纯化与检测 (1)离子交换层析(缓冲液、填料、洗脱条件、盐梯度等条件摸索) (2)硫酸铵分级沉淀和疏水层析 (3)分子筛分离纯化(条件摸索) (4)纯化条件优化摸索 (5)目的条带质谱鉴定(可选) |
2-3周 |
Step2 蛋白纯化及检测 |
*大量纯化(根据小试条件放大) * SDS-PAGE(纯度验证) * WB检测(视项目而定) * 浓度检测(紫外吸收、BCA法等) |
2-3周 |
交付 |
成品蛋白,纯化报告,图片数据 |
服务优势:
--设备先进,纯化方式多元化,适合不同性质的重组蛋白
--专业的技术团队和丰富的经验
--先进的AKTA纯化系统和多种规格的预装纯化柱,适合纯化不同来源的重组蛋白或天然蛋白
--多种蛋白纯化系统(亲和色谱、离子交换、分子筛、疏水色谱、HPLC等)可供选择
--专业技术团队为您量身定制合适的重组蛋白纯化方案,获得能够满⾜下游实验的⾼纯度蛋⽩
--提供全面的蛋白纯化分析报告
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