卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于重组蛋白表达与制备研究。重组蛋白表达纯化产物的分析过程，需要对蛋白的N端序列进行确认。N端区域是蛋白质及多肽重要的结构和功能部位，通过N端的少数几个氨基酸残基就可以对大多数蛋白质进行鉴定。我们拥有经验丰富的技术人员，优质的测序仪器，应用现有的质谱技术平台，可以提供高质量的蛋白质N端测序服务，通过Edman降解法能够准确的测定蛋白质N端多达67个氨基酸序列。
基于Edman降解法的蛋白N-端测序：
Edman法测定单个氨基酸循环包括3步：第一步是在碱性条件下，PITC与蛋白N端的游离氨基结合；第二步是在酸性溶液中，N端残基被切除；第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间来确定氨基酸种类。
测序步骤：蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离，保证样品的纯度满足测序的要求；随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上；经过染色确定把蛋白条带并切出；Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。测序原理如图1所示：
图1 Edman降解法测序原理
Edman测序（N端测序）机器型号：PPSQ-31A
图2 PPSQ-31A 蛋白质N端测序仪器
蛋白N端测序样品要求：
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客户提供 |
要求 |
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PVDF转膜样品 |
* 具体转膜条件请参照附件，请使用PVDF膜，不要用硝酸纤维素膜（NC膜），考马斯亮蓝R250或丽春红染色 |
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蛋白冻干粉 |
* 纯度大于95%则不需要转膜，样品缓冲液需要不含盐，提供20-60ug |
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天然纯化多肽样品 |
* HPLC纯度>95%，提供约100ug |
项目服务特征：
--蛋白表达及pulldown产物的鉴定：重组蛋白氨基酸序列验证以及各种免疫沉淀蛋白产物的验证
--细胞株表达产物的验证：验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理
--超长氨基酸检测：蛋白质N端长达67个氨基酸测序
--抗体药物N端序列验证
--天然提取，分离纯化的小分子多肽序列鉴定
--实验周期快：2-3周
蛋白N端测序实验案例：
某种天然纯化小分子多肽样品：蛋白经过冻干处理后复溶调整蛋白浓度至1ug/ul；上样体积50ul
柱信息： C18，流速是0.6ml/min
图3 HPLC分离图谱
图4：N端第1位氨基酸图谱
图5：N端第2位氨基酸图谱
图6：N端第3位氨基酸图谱
图7：N端第4位氨基酸图谱
图8：N端第5位氨基酸图谱
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