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卡梅德生物(KMD Bioscience)从事微生物基因编辑多年,已拥有了完善的基因编辑技术平台,我们的基因编辑技术平台拥有经验丰富的技术人员,有效的实验流程以及完善的实验设备。我们的科学家可根据客户的具体需求进行一对一的方案定制,提供多种微生物的编辑服务,以满足客户的需求。
铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛,为土壤中存在的较常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。铜绿假单胞菌存在的重要条件是潮湿的环境。本菌是一种常见的条件致病菌,属于非发酵革兰氏阴性杆菌,是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者,以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌。可以通过基因编辑技术在铜绿假单胞菌的染色体水平上进行靶基因的敲除、 插入或替换,以降低其耐药性也为发现铜绿假单胞菌中新的药物靶标提供了有效的工具。
传统λRed同源重组法:
铜绿假单胞菌基因敲除的传统方法是利用其自身的Rec A同源重组系统编码的RecA和RecBCD蛋白介导DNA的同源重组。但是以该系统为基础的基因打靶存在较多的缺点:首先,由于RecBCD具有核酸外切酶活性,线性的打靶DNA将被降解,打靶基因必须整合于戴体上才能进行同源重组;其次,打靶片段需要较长的同源臂,往往长达几百个碱基,而且同源重组效率低,往往不能得到所需的重组子。
图1 传统λRed同源重组法
CRISPR/Cas9基因编辑技术:
CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA(guide RNA)来识别目的基因组序列,并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链,形成双链断裂,损伤后修复会造成基因敲除或敲入等,最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。相较于传统的同源重组敲除基因的方法,CRISPR-Cas9基因编辑技术速度更快,无痕,结果更准确,非常便于您开展后续的实验研究。
图2 CRISPR/Cas9基因编辑技术
服务内容:
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服务内容 |
周期 |
基因敲除 |
客户提供: * 需改造的菌株信息 * 敲除的序列信息 |
5-8周 |
基因敲入或点突变 |
客户提供: * 需改造的菌株信息 * 敲除的序列信息/突变位点信息 |
5-8周 |
卡梅德生物科技多年致力于微生物基因组编辑服务,主要可为您提供传统λRed同源重组法和CRISPR/Cas9技术实现高度准确和有效的无疤痕基因组编辑。我司提供的微生物基因编辑系统主要包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、毕赤酵母、酿酒酵母、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和乳酸菌等。您也可以根据自己的需求指定其他微生物菌属,具体情况还需与我们专业的技术人员联系。
服务优势:
--快速的实验周期,节省客户成本
--成熟的实验技术,实现无疤痕基因组编辑
--多种微生物的基因编辑系统,适用于客户的多种项目
--可为新微生物开发 CRISPR 方法提供有力的技术支持
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